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一、以離子交換色譜法為例,簡述濕法裝柱的操作過程和注意事項
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二、請問什么叫裝柱它是一個什么過程請給出定義,謝謝了,急急急急急急~~~~~~~~
在進行柱層析分離提純時,將柱填料(也叫固定相)裝入分離柱的過程就叫裝柱。裝柱有兩種方式:干法和濕法。
三、急需:如何制備硝酸銀-硅膠柱層析柱,不是薄層板?詳細點
10%硅膠的制備:
層析用硅膠(0.154-0.098mm粒徑)處理:將約300g硅膠裝入層析柱內(nèi),分別用1000mlL甲醇、500mL
淋洗后,通氮氣將其吹干,在30℃
烘干12h
,550℃
焙燒6h
,冷卻至150℃
,取出放入干燥器中冷卻,裝入試劑瓶密封保存。
10%硝酸銀-硅膠:取上述層析用硅膠90g
,逐滴加入400g/L
的AgNO3
溶液28g
,邊加邊振蕩至無結(jié)塊。待30min后,
30℃烘8h
,180℃
烘
12h。將所制成的硅膠放入試劑瓶中密封,保存在干燥器中備用。
裝柱方法:
柱子可以分為:加壓,常壓,減壓
壓力可以增加淋洗劑的流動速度,
減少產(chǎn)品收集的時間,
但是會減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時候,常壓柱是效率最高的,但是時間也最長,比如天然化合物的分離,一個柱子幾個月也是有的。減壓柱能夠減少硅膠的使用量,但是由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā)以及有些比較易分解的東西可能得不到,而且還必須同時使用水泵抽氣。
四、層析柱原理和使用方法
柱層析技術(shù)又稱柱色譜技術(shù),主要原理是根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,經(jīng)多次反復分配將組分分離開來。
柱層析操作時,先在圓柱管中填充不溶性基質(zhì),形成一個固定相。將樣品加到柱子上,用特殊溶劑洗脫,溶劑組成流動相。在樣品從柱子上洗脫下來的過程中,根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,經(jīng)多次反復分配將組分分離。
裝柱子(添硅膠)時,有兩種方法:即濕法裝柱和干法裝柱,二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法,硅膠(固定相)的上表面一定要平整,并且硅膠(固定相)的高度一般為15cm左右,太短了可能分離效果不好,太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。
裝柱方法
濕法裝柱是先把硅膠用適當?shù)娜軇┌鑴蚝?,再填入柱子中,然后再加壓用淋洗劑走柱子,本法最大的?yōu)點是一般柱子裝的比較結(jié)實,沒有氣泡。
干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠,然后再輕輕敲打柱子兩側(cè),至硅膠界面不再下降為止,然后再填入硅膠至合適高度,最后再用油泵直接抽,這樣就會使得柱子裝的很結(jié)實。接著是用淋洗劑走柱子,一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。
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