本文目錄一覽表：

• 一、柱層析的基本操作過程
• 二、硅膠柱層析的操作技術(shù)
• 三、陰離子交換樹脂AG1-X8怎么裝柱阿，裝完怎么用，我用來純化植酸
• 四、請問做柱層析的硅膠怎么做預(yù)處理啊，怎么裝柱

一、柱層析的基本操作過程

柱層析的基本操作過程：主要包括常壓分離、減壓分離和加壓分離 3種模式。

常壓分離是最簡單的分離模式方便、簡單 ,但是洗脫時(shí)間長。減壓分離盡管能節(jié)省填料的使用量 ，但是由于大量的空氣通過填料會(huì)使溶劑揮發(fā) ，并且有時(shí)在柱子外面會(huì)有水汽凝結(jié) ，以及有些易分解的化合物也難以得到 ，而且還必須同時(shí)使用水泵或真空泵抽氣。

加壓分離可以加快淋洗劑的流動(dòng)速度 ，縮短樣品的洗脫時(shí)間，是一種比較好的方法 ，與常壓柱類似 ，只不過外加壓力使淋洗液更快洗脫。壓力的提供可以是壓縮空氣 ，雙連球或者小氣泵等。

柱層析技術(shù)也稱柱色譜技術(shù)。一根柱子里先填充不溶性基質(zhì)形成固定相，將混合樣品加到柱子上后用特別的溶劑洗脫，溶劑組成流動(dòng)相。

在樣品從柱子上洗脫下來的過程中，根據(jù)混合物中各組分在固定向和流動(dòng)相中的分配系數(shù)不同經(jīng)過多次反復(fù)分配，將不同組分逐一分離。根據(jù)填充基質(zhì)和樣品分配交換原理不同，離子交換層析，凝膠過濾層析和親和層析是三種分離混合物的經(jīng)典層析技術(shù)。

二、硅膠柱層析的操作技術(shù)

硅膠柱層析的原理

利用吸附原理，即利用硅膠對中藥混合物中各種成分吸附能力的差異，而使混合物中各成分得以分離的色譜方法。

硅膠柱層析的操作方法及注意事項(xiàng) ：

裝柱

操作要點(diǎn)：裝柱前柱底要墊一層脫脂棉以防吸附劑外漏。 有干法裝柱和濕法裝柱兩種方法

（1）干法裝柱：將硅膠通過漏斗裝入柱內(nèi)，中間不應(yīng)間斷，形成一細(xì)流慢慢加入管內(nèi)。也可用橡皮槌輕輕敲打柱硅膠柱使硅膠裝填連續(xù)均勻、緊密。柱裝好后，打開下端活塞，然后倒入洗脫劑洗脫以排盡柱內(nèi)空氣，并保持一定液面。

（2）濕法裝柱：將最初準(zhǔn)備使用的洗脫劑裝入柱內(nèi)，打開下端活塞，使洗脫劑緩慢流出。然后把硅膠慢慢連續(xù)不斷地倒入柱內(nèi)（或?qū)⒐枘z與適量洗脫劑調(diào)成混懸液慢慢加入柱內(nèi)，），硅膠依靠重力和洗脫劑的帶動(dòng)，在柱內(nèi)自由沉降，此間要不斷把流出的洗脫劑加回柱內(nèi)保持一定的液面，直至把硅膠加完并在柱內(nèi)沉降不再變動(dòng)為止。然后在硅膠上面加一小片濾紙或少許脫脂棉。根據(jù)加樣量控制洗脫劑液面至一定高度。

（3）勻漿法： 攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分?jǐn)嚢?。如果洗脫劑是石油?乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預(yù)先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。

上樣

將欲分離的樣品溶于少量裝柱時(shí)用的洗脫劑中，制成體積小、濃度高的樣品溶液，加入層析柱中硅膠面上。如樣品不溶于裝柱時(shí)用的洗脫劑，則將樣品溶于易揮發(fā)的溶劑中，并加入適量硅膠（不超過柱中硅膠全量的1/10）與其拌勻，除盡溶劑，將拌有樣品的硅膠均勻加到柱頂（始終保持洗脫劑有一定的液面），再覆蓋一層硅膠即可。

上樣時(shí)注意沿著柱內(nèi)壁慢慢加入，始終保持硅膠上端表面平整；上樣量為硅膠的1/60~1/30。

洗脫

洗脫劑的選用可通過薄層色譜篩選，一般TLC展開時(shí)Rf 值為0.2~0.3的溶劑系統(tǒng)是最佳的洗脫系統(tǒng)，采用梯度洗脫法洗脫。

先打開柱下端活塞，保持洗脫劑流速1~2滴/秒。上端不斷添加洗脫劑（可用分液漏斗控制添加速度與下端流出速度相近）。如單一溶劑洗脫效果不好，可用混合溶劑洗（一般不超過三種溶劑），通常采用梯度洗脫。洗脫劑的洗脫能力由弱到強(qiáng)逐步遞增。

收集處理

等份收集洗脫液，每份收集量大概與所用硅膠的量相當(dāng)。每份洗脫液采用薄層定性檢查，合并含相同成分的洗脫液。經(jīng)濃縮、重結(jié)晶處理往往可得到某一單體成分。如仍為幾個(gè)單體成分的混合物，不易析出單體成分的結(jié)晶。則需要進(jìn)一步層析或用其他方法分離。

注：

(1)柱色譜分離能力比薄層分離能力強(qiáng)，效果更好，尤其對結(jié)構(gòu)相似、性質(zhì)接近、采用薄層難以分離的成分分離效果好。

(2) 洗柱子能不用含水的混合溶劑，就盡量不要用。



三、陰離子交換樹脂AG1-X8怎么裝柱阿，裝完怎么用，我用來純化植酸

層析柱大小有什么要求嗎，我這個(gè)國標(biāo)用的是0.8x10cm，應(yīng)該很難操作吧

追答

都是一樣的，只要不進(jìn)氣泡就好。

四、請問做柱層析的硅膠怎么做預(yù)處理啊，怎么裝柱

分類: 教育/科學(xué) 科學(xué)技術(shù)
問題描述:

我是做天然產(chǎn)物分離實(shí)驗(yàn)的

解析:

硅膠的預(yù)處理

我們以濃鹽酸浸泡硅膠14小時(shí)，然后用蒸餾水洗滌硅膠4次后，將起進(jìn)行減壓抽濾，后不斷加蒸餾水沖洗。在1小時(shí)之后，抽濾的水呈中性，但仍然含有氯離子。經(jīng)過4小時(shí)不斷的沖洗才使得抽濾液中基本不含氯離子。晾干一周后，在110℃烘箱中活化2小時(shí)。

活化后的硅膠加石油醚浸泡并攪拌均勻。在裝柱時(shí)，宜使用口徑較大的玻璃漏斗置于 層析柱上部，注入1/2高的石油醚，打開下部活塞，然后盡量均勻地將硅膠傾入漏斗，這樣可以防止層析柱中形成斷層(這一步是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟)。

裝柱

裝柱子（添硅膠）時(shí)，有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長了也會(huì)由于擴(kuò)散或拖尾導(dǎo)致分離效果不好。

濕法裝柱是先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝?，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗?走柱子 ，本法最大的優(yōu)點(diǎn)是一般柱子裝的比較結(jié)實(shí)，沒有氣泡。

干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側(cè)，至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會(huì)使得柱子裝的很結(jié)實(shí)。接著是用淋洗劑 走柱子 ，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。干法裝柱較方便，但最大的缺陷在于 走柱子 時(shí)，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺到），容易產(chǎn)生氣泡，這一點(diǎn)在使用低沸點(diǎn)的淋洗劑時(shí)如乙醚，二氯甲烷更為明顯。雖然產(chǎn)生的氣泡在加壓的情況下不易察覺，但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時(shí)候，氣泡就會(huì)釋放出來，嚴(yán)重時(shí)，整個(gè)柱子變花，樣品不可能平整地通過，當(dāng)然也就談不上分離了。解決的辦法是：第一、硅膠一定要天結(jié)實(shí)；第二、 一定要用較多的溶劑 走柱子 ，一定要到柱子的下端不再發(fā)燙，恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。

也有介紹在硅膠的最上層填上一小層石英砂，防止添加溶劑的時(shí)候，使得樣品層不再整齊。但我的感覺是如果小心上樣，添加溶劑，則沒有這個(gè)必要。

上樣也有干法和濕法之分：干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑（最好就是展開劑，如果展開劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液，沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入。然后用少量 薌 洗滌后，再加入。濕法較方便，熟手一般采用此法

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